和记AG

在体外诊断试剂的注册申报过程中，江苏和记AG生物医药技术股份有限公司的人PCA3、PSA基因检测试剂盒（荧光PCR法）提供了一个典型的案例。

通过对这份审评报告的详细分析，和记AG可以提炼出一些关键点，帮助企业更好地进行相应产品的注册申报工作。

产品概述与预期用途

首先，明确产品的预期用途是注册申报的基础。

该产品用于体外检测总PSA在4~10ng/mL（灰度区）的疑似前列腺癌患者尿液样本中PCA3基因及PSA基因的表达量，通过计算PCA3基因与PSA基因表达量的比值，作为是否需要穿刺活检的辅助诊断指标。

这一明确的预期用途不仅有助于产品的定位，也为后续的临床评价提供了方向。

报告中详细说明了PCA3和PSA的生物学特性，PCA3在前列腺癌中高表达，而PSA则具有组织特异性但不具备肿瘤特异性。

这些信息为产品的临床应用提供了科学依据。

产品组成与检验原理

产品的组成成分和检验原理是审评的重要内容。

该试剂盒由人PCA3/PSA基因mRNA提取试剂和人PCA3/PSA基因检测试剂两部分组成，基于磁珠特异性捕获和一步法PCR技术检测原理。

详细的组成成分和检验原理不仅有助于审评人员理解产品的技术路线，也为企业提供了在申报材料中详细描述产品技术细节的范例。

报告中提到，尿液中PCA3、PSA mRNA的提取采用磁珠特异性捕获方法，结合荧光PCR检测技术，确保了检测的灵敏度和特异性。

临床前研究

临床前研究是注册申报的核心部分之一。

报告中详细介绍了主要原材料的选择、企业参考品和质控品的设置、生产工艺及反应体系研究、分析性能评估等内容。

在上，产品的主要原材料包括磁珠、捕获探针、dNTP、尿嘧啶-DNA糖基化酶、RNase抑制剂、Taq酶、引物和探针等。

这些原材料均通过外购获得，申请人对供应商进行了筛选，并制定了技术要求和质量标准，确保了原材料的质量可控。

企业参考品包括提取参考品、准确度参考品、阳性符合率参考品、特异性参考品、PCA3交叉特异性参考品、PSA交叉特异性参考品、线性参考品、定量限参考品和精密度参考品。

质控品包括阳性质控品和阴性质控品，用于检测过程中的质量控制。

申请人对试剂盒的反应体系进行了详细的研究，包括捕获液中HEPES浓度、LiCl浓度、磁珠用量、捕获探针用量、引物探针浓度、DNA聚合酶用量、逆转录酶浓度、UDG酶浓度、镁离子浓度、dNTP浓度、PCR反应体积、PCR模板体积等的确定，以及UDG酶作用温度和时间、逆转录温度时间、PCR反应退火温度与时间、反应循环数等反应条件的优化。

分析性能评估是注册申报中的重要环节，直接关系到产品的质量和可靠性。

报告中详细介绍了该产品在分析性能评估方面的具体内容和结果。

3.4.1  核酸提取性能

申请人采用试剂盒包含的提取试剂，对高值前列腺癌样本进行提取，评价提取浓度、纯度等性能。

结果表明，该核酸提取试剂的提取性能符合研制设计要求，能够有效富集目标基因，确保后续检测的准确性。

3.4.2  准确性

申请人采用三批成品试剂盒，对准确度参考品、阳性符合率参考品进行检测，结果符合接受标准。

同时，选择了若干例临床确诊为前列腺癌或非前列腺癌的临床尿液样本，与数字PCR方法同步进行真实临床尿液样本检测。

测试结果显示，本检测试剂检测结果与数字PCR方法检测结果一致性良好，浓度检测结果符合接受标准，证明了试剂盒的准确性。

3.4.3  精密度

申请人使用三批试剂，分别对中阳性、临界阳性和阴性3个水平的样本，进行了20天的多次检测，对批内/间、操作者间、日内/间、室内精密度和室间精密度等进行了评价。

结果表明，精密度良好，PCA3基因和PSA基因检测浓度对数值的变异系数（CV%）≤5%；PCA3 Score值的变异系数（CV%）≤20%，确保了检测结果的一致性和可重复性。

3.4.4  检出限

申请人使用三批试剂，检测两个靶基因不同浓度梯度的样本，将≥95%阳性检出率的浓度水平作为确定的检出限，并进行检出限验证。

最终确定PCA3检出限不高于1000 copies/mL；PSA检测限不高于6000 copies/mL，确保了试剂盒在低浓度样本中的检测能力。

3.4.5  分析特异性

分析特异性研究包含交叉反应和干扰试验。

申请人对PSA基因之间的交叉、与非靶标的交叉以及检测样本相关常见微生物（白色念珠菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、假单胞菌、金黄色葡萄球菌）的交叉反应进行研究，结果显示，检测试剂与上述病原体无交叉。

申请人对尿液常见的外源及内源干扰物质进行研究，结果显示，白蛋白（≤60g/L）、未结合胆红素（≤342μmol/L）、胆固醇（≤13mmol/L）、葡萄糖（≤55mmol/L）、血红蛋白免疫球蛋白G（≤32mg/L）、甘油三酸脂（≤37mmol/L）等干扰物质未对检测结果产生干扰影响，确保了试剂盒在不同样本条件下的特异性。

3.4.6  线性

申请人采用三批成品试剂盒，对包含高浓度靶基因的样本进行梯度稀释后重复检测，确定PCA3样本线性范围为1.25 × 10³ copies/mL~1.25 × 10⁷ copies/mL、PSA样本线性范围为6.25 × 10³ copies/mL~6.25 × 10⁷ copies/mL，确保了试剂盒在不同浓度范围内的检测准确性。

阳性判断值研究

阳性判断值的确定是体外诊断试剂注册申报中的关键环节。

该产品通过ROC曲线分析，确定了Score值>40.1518时检测结果为阳性，Score值≤40.1518时检测结果为阴性。

这一科学合理的阳性判断值研究为产品的临床应用提供了可靠依据。

申请人采用总PSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者的尿液样本212例，使用申报产品对临床样本进行检测并计算Score值，与临床诊断结果进行对比，经ROC曲线分析，根据约登指数最大原则，确定了阳性判断值。

稳定性研究

稳定性研究是确保产品在储存和使用过程中保持性能稳定的重要环节。

报告中详细介绍了实时稳定性、使用稳定性、样本稳定性等研究结果，支持了产品说明书中的储存条件及有效期声明。

在实时稳定性研究中，申请人将试剂盒在规定的储存条件下（组分1于2~8℃保存，组分2于-20℃±3℃中保存，其中2xPCA3反应液和2xPSA反应液于-20℃±3℃避光保存）放置一定时间（如0、3、6、9、12个月），定期取出试剂盒进行检测，评估其性能是否发生变化。结果表明，试剂盒在储存期间性能稳定，符合预期要求。

在使用稳定性研究中，申请人评估了试剂盒在开封后的稳定性。

结果显示，试剂盒开封后在2~8℃条件下可稳定储存不超过48小时，支持了说明书中的声明。

样本稳定性研究方面，申请人考察了不同储存条件下样本的检出性能。

结果表明，处理后的尿液样本在2~8℃下可保存不超过3天，在-20℃±3℃下可保存不超过12个月，在-80℃以下也可保存不超过12个月，且避免反复冻融，冻融次数不得超过5次。

这些研究结果为样本的采集、储存和运输提供了科学依据，确保了检测结果的可靠性。

临床评价

临床评价是注册申报中不可或缺的一部分。

该产品在四家临床试验机构开展了临床试验，采用试验体外诊断试剂与临床参考标准进行比较研究，结果显示针对tPSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者，试验体外诊断试剂具有较好的临床性能。

申请人在上海市第十人民医院、复旦大学附属华东医院、昆山市第一人民医院和浙江省人民医院共四家临床试验机构开展临床试验，采用试验体外诊断试剂与临床参考标准进行比较研究，同时进行临床常规使用的游离PSA与总PSA比值（fPSA/tPSA）与临床参考标准比较研究，并进一步比较试验体外诊断试剂与fPSA/tPSA的临床性能，从而确认试验体外诊断试剂的预期用途，其中，临床参考标准采用穿刺活检病理结果。

临床试验共前瞻性纳入556例疑似前列腺癌患者，主要包括总PSA（tPSA）在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者。

试验体外诊断试剂检测样本类型为尿液样本，PSA指标检测样本类型为血清。

临床试验结果显示，针对tPSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者，试验体外诊断试剂与临床参考标准对比的结果如下表所示：

fPSA/tPSA与临床参考标准对比的结果如下表所示：

上述结果显示，针对PSA在4~10ng/mL的疑似前列腺癌患者，试验体外诊断试剂具有较好的临床性能。

产品受益风险判定

在综合评价意见中，审评中心指出该产品的上市为适用人群带来的受益大于风险，但需要在说明书中提示相关信息。

这一部分内容提醒企业在申报时需充分考虑产品的受益与风险，并在说明书中明确提示相关信息，以保障产品的安全性和有效性。

报告中提到，产品不能单独决定是否需要穿刺活检，临床医生应结合患者的临床表现和其他实验室检查等指标进行综合分析，做出诊断。

最后的话

通过对江苏和记AG生物医药技术股份有限公司的人PCA3、PSA基因检测试剂盒（荧光PCR法）审评报告的分析，和记AG可以看到，明确的产品预期用途、详细的组成成分和检验原理、严格的临床前研究、科学的阳性判断值研究、充分的稳定性研究、可靠的临床评价以及综合的受益风险判定是注册申报成功的关键。

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